在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,廣大科研工作者一直飽受微生物污染的困擾,幾乎所有科研單位的細(xì)胞房都曾經(jīng)遭受過(guò)細(xì)菌、真菌、支原體、黑膠蟲(chóng)的污染,尤其是一些珍貴的細(xì)胞種子,一 旦招惹上這幾個(gè)家伙,甚至面臨“絕種”的危險(xiǎn)。針對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)當(dāng)中面臨的普遍的問(wèn)題,作為科研工作者的我們必須清楚認(rèn)識(shí)這些微生物,并通過(guò)技術(shù)手段判斷細(xì)胞遭受了哪種污染, 準(zhǔn)確的對(duì)癥下藥,才能為我們的細(xì)胞保駕護(hù)航。
1 細(xì)菌污染
1.1 細(xì)菌污染的鑒別
細(xì)菌污染是細(xì)胞培養(yǎng)當(dāng)中最常出現(xiàn)的污染類型,槍頭不小心碰到瓶壁、手不小心從培養(yǎng)瓶口處穿過(guò)、培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)瓶等等,不經(jīng)意的一個(gè)小動(dòng)作,都可能會(huì)造成細(xì)菌污染,以致于實(shí)驗(yàn)前功盡棄。 細(xì)菌污染在沒(méi)有爆發(fā)或培養(yǎng)體系中含有雙抗時(shí),細(xì)菌污染較容易被科研工作者忽視,黑點(diǎn)在顯微鏡下一穿而過(guò),小黑點(diǎn)因?yàn)閿?shù)量少且移動(dòng)迅速而不易發(fā)現(xiàn)。隨著細(xì)菌在培養(yǎng)體系中的增多或者體系中撤掉雙抗以后,細(xì)菌可以從鏡下明顯識(shí)別,會(huì)呈現(xiàn)黑色條狀、棒狀、球狀, 培養(yǎng)基的外觀也會(huì)發(fā)生明顯的變化,培養(yǎng)基變渾濁,有細(xì)沙狀沉淀,有時(shí)會(huì)伴有臭味。
1.2 細(xì)菌污染的解決方式
一般的細(xì)胞培養(yǎng)體系中,普遍采用雙抗或者三抗進(jìn)行細(xì)菌的預(yù)防,但這兩者存在一定的局限性,比如只能預(yù)防,而不能拯救已經(jīng)細(xì)菌污染的細(xì)胞。另外,很多科研工作者從事原代的細(xì)胞分離和培養(yǎng)工作,在從動(dòng)物身上取材并分離培養(yǎng)的過(guò)程中,極易造成細(xì)菌污染,如果只是加入雙抗或三抗進(jìn)行沖洗組織,細(xì)菌污染無(wú)法避免,造成了珍貴動(dòng)物組織的浪費(fèi)。
好物推薦-鏡像綺點(diǎn)(iCell)細(xì)胞污染高效清除劑
iCell 細(xì)胞污染高效清除劑,不僅兼具雙抗或三抗預(yù)防細(xì)菌的功效,還可以清除支原體污染,有效消除真菌和細(xì)菌的污染,只需 1-3 天就可顯著抑制支原體、真菌、細(xì)菌的增殖, 本產(chǎn)品經(jīng)過(guò)了上百種細(xì)胞的測(cè)試和長(zhǎng)期的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,兼具高效和廣譜清除細(xì)胞污染物的能力,對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)幾乎無(wú)影響,大程度上挽救您的細(xì)胞。
2.真菌污染
2.1 真菌污染的鑒別
實(shí)驗(yàn)室污染的真菌一般為三類:念珠菌、酵母菌、霉菌,細(xì)胞污染真菌通常不易察覺(jué),只有霉菌會(huì)逐漸出現(xiàn)細(xì)絲團(tuán)狀漂浮物,較容易從外觀發(fā)覺(jué)污染,其他真菌污染不像細(xì)菌污染培養(yǎng)基會(huì)渾濁,污染后培養(yǎng)液清澈透亮,與未污染的細(xì)胞從外觀上看無(wú)明顯變化。
在顯微鏡下比較容易判斷污染類型,念珠菌呈卵圓狀,在細(xì)胞周邊生長(zhǎng),酵母菌出芽生殖時(shí)有明顯的一大一小連體結(jié)構(gòu),霉菌可觀察到菌體,菌絲呈絲狀、管狀、樹(shù)枝狀。
2.2 真菌污染的解決方式
真菌污染由于不容易通過(guò)培養(yǎng)基的變化來(lái)判斷,一般發(fā)現(xiàn)時(shí)就是已經(jīng)爆發(fā)了,鏡下會(huì)出現(xiàn)明顯團(tuán)狀或黑色絲狀污染物,細(xì)胞狀態(tài)明顯變差,很難救活。傳統(tǒng)的預(yù)防真菌污染的方式為培養(yǎng)體系中加入三抗,但是一旦發(fā)生真菌污染,三抗對(duì)于明顯的真菌污染就顯得心有余而力不足,此時(shí)建議如果是還留存種子的細(xì)胞就立刻扔掉,*消毒滅菌細(xì)胞房和 CO2 培養(yǎng)箱,扔掉可能被污染的培養(yǎng)基,對(duì)用過(guò)的實(shí)驗(yàn)器材進(jìn)行滅菌。
好物推薦-鏡像綺點(diǎn)(iCell)真菌清除劑
真菌清除劑用于防止細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的真菌(包括酵母)污染,還可用于消除細(xì)胞培養(yǎng)物中的真菌(含酵母)污染。療效遠(yuǎn)超真菌抗生素兩性霉素 B,對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的真菌污染,如白色念珠菌、曲霉、酵母有很好的療效。
真菌清除試劑經(jīng)過(guò)了上百種細(xì)胞的測(cè)試和長(zhǎng)期的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,只需 1-3 天就可以抑制真菌增長(zhǎng)。對(duì)細(xì)胞基本無(wú)害,具有高效、特異性殺滅的特點(diǎn),大程度上挽救珍貴的細(xì)胞,減少真菌污染帶來(lái)的損失。
3 黑膠蟲(chóng)污染
3.1 黑膠蟲(chóng)污染的鑒別
“黑膠蟲(chóng)”是一種常見(jiàn)的細(xì)胞污染物,與細(xì)胞共生,隨細(xì)胞傳代而傳代。“黑膠蟲(chóng)”與細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)性生長(zhǎng),對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)不利,嚴(yán)重時(shí)導(dǎo)致細(xì)胞死亡。目前很多細(xì)胞存在被“黑膠蟲(chóng)”污染的現(xiàn)象,對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)及其后續(xù)實(shí)驗(yàn)造成了極大地影響。
“黑膠蟲(chóng)”污染的細(xì)胞常見(jiàn)的特性有以下幾點(diǎn):
(1)培養(yǎng)基不渾濁,但在顯微鏡下觀察細(xì)胞時(shí),細(xì)胞周圍和培養(yǎng)液中有很多“小黑點(diǎn)”, 且隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)“小黑點(diǎn)”逐漸增多,更換培養(yǎng)液或洗滌細(xì)胞不能將其去除;
(2)“黑膠蟲(chóng)”污染的細(xì)胞,營(yíng)養(yǎng)消耗快,需要頻繁更換培養(yǎng)液;
(3)“黑膠蟲(chóng)”污染的細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢,細(xì)胞狀態(tài)差,空泡化嚴(yán)重,甚至還可能導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)的改變。
3.2 黑膠蟲(chóng)污染的解決方式
對(duì)于黑膠蟲(chóng)污染的細(xì)胞,最為快速有效的處理方式就是采用黑膠蟲(chóng)清除劑對(duì)黑膠蟲(chóng)進(jìn)行清除,同時(shí)確保培養(yǎng)體系中的血清必須為無(wú)黑膠蟲(chóng)和原蟲(chóng)污染的優(yōu)質(zhì)血清。
好物推薦-鏡像綺點(diǎn)(iCell)黑膠蟲(chóng)清除劑
黑膠蟲(chóng)清除試劑用于清除細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中產(chǎn)生的“黑點(diǎn)”,只需 1-3 天就可以顯著抑制“黑點(diǎn)”生長(zhǎng),一周左右即可清除“黑點(diǎn)”。
本產(chǎn)品經(jīng)過(guò)了上百種細(xì)胞的測(cè)試和長(zhǎng)期的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)無(wú)明顯影響,具有高效、特異性殺滅的特點(diǎn),可顯著清除黑膠蟲(chóng)污染,大程度上挽救珍貴的細(xì)胞。
黑膠蟲(chóng)清除案例
4 支原體污染
4.1 支原體污染的鑒別
支原體直徑約為 0.1-0.3 μm,具有變形能力,可透過(guò)常見(jiàn)過(guò)濾膜(0.22-0.45 μm),因此常規(guī)的無(wú)菌過(guò)濾方法不能將其去除,常用的抗生素也對(duì)支原體無(wú)效。
支原體污染是細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域的一個(gè)世界性問(wèn)題,世界各國(guó)細(xì)胞系支原體污染的平均比例為 30-60%。支原體可通過(guò)細(xì)胞之間交叉污染,操作人員的口腔、皮膚造成污染,或者血清等添加物而帶入污染。
支原體在光學(xué)顯微鏡下不可見(jiàn),一般不會(huì)引起培養(yǎng)物混濁,因此細(xì)胞被支原體污染一般難以察覺(jué)。
支原體會(huì)消耗必須氨基酸,影響細(xì)胞生長(zhǎng)速率,促進(jìn)代謝物積累,改變細(xì)胞形態(tài),影響 DNA、RNA 以及蛋白質(zhì)的合成,抑制細(xì)胞因子表達(dá),改變被污染細(xì)胞的基因表達(dá)譜,誘導(dǎo)染色體畸變。 好物推薦-鏡像綺點(diǎn)(iCell)支原體 PCR 檢測(cè)試劑盒
支原體 PCR 檢測(cè)試劑盒是優(yōu)選直擴(kuò)式 PCR 酶擴(kuò)增支原體基因組中保守 16SrDNA 而設(shè)計(jì)的,不會(huì)擴(kuò)增細(xì)菌等其他基因組,兼具特異性和高靈敏性的特點(diǎn),且本試劑盒檢測(cè)范圍廣,可檢測(cè):(1)M.Hyorhinis,(2)M.Fermentans,(3)M.Arginini,(4)M. hominis,(5)M. orale,(6)M. salivarium,(7)M.pirum,(8)Acholeplasma Laidlawii,(9)M. agalactiae, (10)M.bovis,(11)M. buccale,(12)M. arthritidis,(13)M. pulmonis 等幾乎所有常見(jiàn)的污染細(xì)胞的支原體(注:M.為 Mycoplasma 的縮寫(xiě))。
以上 13 種支原體約占細(xì)胞支原體污染的 99% 以上。絕大多數(shù)支原體污染集中于前 8 種。因此非常適合于與細(xì)胞生物學(xué)相關(guān)的科研實(shí)驗(yàn)室及企業(yè)的日常支原體檢測(cè)。
●高廣譜性,可檢測(cè)所有可能含有支原體的樣品
●高靈敏度,可檢測(cè)低至 10 copies 的支原體
●高特異性,真核生物、細(xì)菌的基因組不會(huì)被檢測(cè)
●高保真性,本試劑盒含有陽(yáng)標(biāo)和陰標(biāo),可有效避免 PCR 反應(yīng)假陰性和假陽(yáng)性
●操作簡(jiǎn)易,本試劑盒的預(yù)混體系包含 PCR 反應(yīng)所需試劑
●耗時(shí)短,本試劑盒能夠在 2 小時(shí)內(nèi)完成支原體檢測(cè)
4.2 支原體污染的解決方式
好物推薦-鏡像綺點(diǎn)(iCell)支原體預(yù)防劑
支原體預(yù)防試劑適合細(xì)胞支原體感染的預(yù)防,不僅可用于預(yù)防環(huán)境和體系可能造成的支原體交叉污染,還可應(yīng)用于防止支原體污染的復(fù)發(fā)。
本產(chǎn)品經(jīng)過(guò)了上百種細(xì)胞的測(cè)試和長(zhǎng)期的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,只需 1-3 天就可以顯著抑制支原體生長(zhǎng),對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)幾乎無(wú)影響,兼具高效與溫和清除細(xì)胞污染物的特點(diǎn),大程度上挽救您的細(xì)胞。
好物推薦-鏡像綺點(diǎn)(iCell)支原體清除劑(三款):
支原體高效清除劑、支原體清除劑、支原體清除劑 plus
支原體清除劑適合支原體污染嚴(yán)重的細(xì)胞,不僅可用于細(xì)胞株,還可應(yīng)用于“脆弱”和易變形的細(xì)胞,如各類原代細(xì)胞、干細(xì)胞、上皮樣細(xì)胞系,不僅可以顯著清除支原體污染,還具有消除細(xì)菌污染的能力。
支原體清除劑有三種,分別是支原體清除劑、支原體高效清除劑、支原體清除劑 plus。
支原體溫和清除劑:溫和、高效清除支原體,對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)幾乎無(wú)影響,覆蓋所有細(xì)胞類型。
支原體清除劑:適合支原體污染非常嚴(yán)重,產(chǎn)生較強(qiáng)耐藥性的細(xì)胞支原體清除。
支原體清除劑 plus:適用于支原體污染非常嚴(yán)重、有*耐藥性且污染多種支原體的情況,此情況較為少見(jiàn)。
本產(chǎn)品經(jīng)過(guò)了上百種細(xì)胞的測(cè)試和長(zhǎng)期的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,只需 1-3 天就可以顯著抑制支原體生長(zhǎng), 2 周左右即可清除支原體污染,兼具快速和高效清除細(xì)胞污染物的特點(diǎn),大程度上挽救您的細(xì)胞。
好物推薦-鏡像綺點(diǎn)(iCell)支原體清除服務(wù)
① 根據(jù)客戶提供的細(xì)胞名稱、細(xì)胞代次、細(xì)胞類型制定細(xì)胞的支原體清除方案;
② 細(xì)胞 STR 鑒定;
③ 支原體 PCR 高敏法檢測(cè)支原體污染程度;
④ 細(xì)胞的支原體清除。一般污染單一支原體的清除時(shí)間為 2 周左右,感染多種支原體且非常嚴(yán)重的細(xì)胞,清除時(shí)間需要延長(zhǎng),約 3-4 周左右;
⑤ 2 周后,再次進(jìn)行支原體檢測(cè),如果細(xì)胞支原體清除干凈,將換為 iCell 預(yù)防支原體方案,繼續(xù)一周左右時(shí)間;如未清除干凈,適當(dāng)延長(zhǎng) 1-2 周清除頑固支原體,1-2 周后再次進(jìn)行復(fù)檢。
支原體清除案例
如上圖 1 所示,左側(cè)為支原體污染的 MCF-7(100X) 細(xì)胞,右側(cè)為支原體清除后的 MCF-7 細(xì)胞,倒置顯微鏡下可明顯看出細(xì)胞間隙間黑點(diǎn)明顯減少,細(xì)胞邊緣清晰,狀態(tài)良好。
如上圖 2 所示,左側(cè)為支原體污染的 Hep G2 (200X)細(xì)胞,右側(cè)為支原體清除試劑處理的Hep G2 細(xì)胞。左側(cè)有支原體污染的細(xì)胞樣品可以觀察到細(xì)胞核周圍微粒狀或絲狀藍(lán)色熒光。
支原體污染嚴(yán)重的細(xì)胞可以觀察到大量微粒狀或絲狀藍(lán)色熒光。右側(cè)細(xì)胞支原體污染被清除干凈,僅觀察到細(xì)胞核的藍(lán)色熒光,證明支原體已被清除干凈。 好物推薦-鏡像綺點(diǎn)(iCell)實(shí)驗(yàn)室除菌衛(wèi)士
實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)士為高效廣譜除菌劑,具有廣譜殺菌性,能有效阻止真菌(和孢子),細(xì)菌(和孢子),支原體和病毒(包括 HIV 和 Hepatitis B)的生長(zhǎng)和污染,去除效率能夠達(dá)到99.999 %,不含汞、甲醛、ben酚或酒精等刺激性物質(zhì),無(wú)毒、無(wú)刺激性氣味、可生物降解、不染色衣服、可消除氣味。
對(duì)一般的工作臺(tái)和器材表面(包括不銹鋼材質(zhì))沒(méi)有任何損傷,不損傷漆面光澤,不會(huì)使塑料老化,培養(yǎng)箱、超凈工作臺(tái)、生物安全柜、細(xì)胞培養(yǎng)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室均可使用。
實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)士的殺菌范圍依賴噴灑時(shí)間,15 秒內(nèi)可滅活:大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、變形桿菌、沙門氏菌、假絲酵母菌;
30 秒內(nèi)可滅活:青霉菌、曲霉菌;
60 秒內(nèi)可滅活:綠膿桿菌;
30 分鐘內(nèi)可滅活:支原體、衣原體、金黃色葡萄球菌、埃希氏菌、假單胞菌、克雷伯氏菌、假絲酵母菌;30 分鐘可破壞:曲霉菌(包括黑曲霉)、艾滋病毒,乙型肝炎病毒。
本品為即用型噴霧,直接使用即可。
好物推薦-鏡像綺點(diǎn)(iCell)水浴鍋除菌劑
水浴鍋除菌劑是針對(duì)水浴環(huán)境的高效抗菌劑,能夠有效殺滅細(xì)菌、真菌、支原體,保持細(xì)胞水浴的無(wú)菌狀態(tài)。
水浴鍋、水浴搖床是細(xì)胞污染源之一,使用本產(chǎn)品能夠有效清除和抑制革蘭氏陽(yáng)性菌、革蘭氏陰性菌、支原體等易在水中滋生的微生物生長(zhǎng),有效防止細(xì)胞污染。
好物推薦-鏡像綺點(diǎn)(iCell)細(xì)胞培養(yǎng)箱水盤除菌劑
CO2 培養(yǎng)箱在細(xì)胞培養(yǎng)中普遍使用,由于半敞開(kāi)式的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基的滲漏,高濕度及適宜溫度為培養(yǎng)箱中微生物滋生提供條件,所以要提前預(yù)防,避免污染源出現(xiàn)。
細(xì)胞培養(yǎng)箱水盤除菌劑是 CO2 培養(yǎng)箱水盤的消毒劑,可有效殺滅支原體、細(xì)菌、酵母菌和真菌,建議每 2 周或至少 1 個(gè)月,進(jìn)行一次系統(tǒng)地清潔和消毒培養(yǎng)箱,可去除培養(yǎng)過(guò)程中的潛在污染源。
細(xì)胞污染不易察覺(jué),卻是關(guān)乎我們實(shí)驗(yàn)成敗的大事,越是需要我們?nèi)粘5恼J(rèn)真對(duì)待,相信以上對(duì)于細(xì)胞房常見(jiàn)污染物的鑒別和解決方案的制定,能幫助我們科研工作者解決細(xì)胞最重要的問(wèn)題,如果您還是未找到問(wèn)題所在,歡迎您登錄鏡像綺點(diǎn)網(wǎng)站,關(guān)注鏡像綺點(diǎn),我們期待著為您解答。